一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測茶葉中國合成著色劑的殘留。該處理方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
檸檬黃（CAS：1934-21-0），莧菜紅（CAS：915-67-3），胭脂紅（CAS：2611-82-7），
日落黃（CAS：2783-94-0），誘惑紅（CAS：25956-17-6），亮藍（CAS：3844-45-9）。
三、應用范圍
本方法適用于茶葉合成著色劑量的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
SimplyGreen，聚酰胺小柱500mg/6ml（Cat.No.）
五、實驗步驟
1、樣品提取
準確稱取2.0g紅茶茶葉置于50ml離心管中，加入20ml水，于震蕩器中震蕩提取30min，4000r/min離心5min，上層清液備用。
2、SPE柱凈化
（1）活化：聚酰胺柱使用前用5ml甲醇活化，5ml水平衡。
（2）上樣和洗脫：取5ml備用液過柱，棄去流出液；用3ml水淋洗，再用足量甲醇-甲酸溶液（6:4，v/v）淋洗至流出液透明，棄去流出液，抽干小柱；用5ml5%氨水甲醇洗脫，收集洗脫液。（整個上樣、洗脫過程控制流速在1ml/min內）。
（3）上機測試：將洗脫液定容至5ml，取1ml經0.22um水系慮膜過濾，供上機測試。
3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2695
色譜柱：InertSustain-C18（4.6mm×250mm，5um）
檢測器：Waters 2996紫外檢測器
檢測波長：254nm
流動相：A：甲醇 B：0.02mol/L乙酸胺緩沖溶液
表1梯度洗脫條件
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時間/min
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A（%）
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B（%）
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--
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5
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95
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10.0
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20
|
80
|
|
18.0
|
60
|
40
|
|
25.0
|
60
|
40
|
|
25.1
|
5
|
95
|
|
35.0
|
5
|
95
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流速：1.0ml/min
進樣體積：20ul
六、實驗結果
1、10.0mg/kg茶葉中合成著色劑的添加回收結果
表2 10.0mg/kg茶葉中合成著色劑的添加回收結果
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名稱
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回收率（%）
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平均回收率（%）
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RSD（%）
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1
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2
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3
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檸檬黃
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90.5
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88.5
|
88.9
|
89.3
|
1.2
|
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莧菜紅
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107.7
|
107.1
|
106.6
|
107.1
|
0.5
|
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胭脂紅
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109.4
|
107.1
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110.0
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108.8
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1.4
|
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日落黃
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104.4
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106.1
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99.0
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103.2
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3.6
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誘惑紅
|
107.8
|
108.2
|
105.9
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107.3
|
1.1
|
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亮藍
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87.2
|
93.4
|
89.2
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89.9
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3.5
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2.添加水平為10.0mg/kg茶葉中合成著色劑檢測的液相色譜圖
圖1添加水平為10.0mg/kg茶葉中合成著色劑檢測的液相色譜圖
