動(dòng)物源性食品中氯霉素檢測(cè)的固相萃取方法
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?span>
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，LC-MS/MS法作為檢測(cè)手段。該方法可簡(jiǎn)化樣品的前處理過(guò)程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡(jiǎn)便。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
氯霉素(CAS:56-75-7)。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于動(dòng)物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS檢測(cè)及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《GB/T
22338-2008動(dòng)物源性食品中氯霉素類(lèi)藥物殘留量測(cè)定》。
五、實(shí)驗(yàn)材料
SimplyGreen C18固相萃取柱1000mg/6mL(Cat.No.)。
六、實(shí)驗(yàn)方法
1、樣品提取
將稱(chēng)取5
g豬肉試樣，精確到0.01 g。置于50 mL離心管中，加入5 mL水，于渦旋混合器上快速混合1 min，使試樣完全溶解。準(zhǔn)確加入15mL乙酸乙酯，在振蕩器上振蕩10 min，以3000r/min離心10 min，準(zhǔn)確吸取上層乙酸乙酯12 mL轉(zhuǎn)入15 mL的離心管中，置于濃縮吹氮儀在45 ℃吹掃蒸干，加入5 mL水溶解，待凈化。
2、SPE柱凈化
(1)活化：依次采用5 mL甲醇、5 mL水活化C18固相萃取柱。
(2)凈化：將提取液過(guò)C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3 mL水過(guò)柱，然后再用5 mL乙腈:水(2:8, v/v)淋洗柱，棄去全部淋出液。用真空泵減壓抽干10 min。
(3)洗脫：用6 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于10 mL離心管中，于45℃用氮?dú)獯蹈梢捍蹈?，用乙?span>:水(2:8, v/v)定容至1 mL，供LC-MS/MS上機(jī)測(cè)定。
3、LC-MS/MS條件
色譜柱：Venusil ASB C18(2.1×150mm，5 μm)
質(zhì)譜儀：API 4000
流動(dòng)相：A:10 mmol/L乙酸銨溶液 B: 甲醇
流速：0.2 mL/min
柱溫：40 ℃
進(jìn)樣體積:5 μL
離子源：電噴霧(ESI)，負(fù)離子模式
檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)
表1 質(zhì)譜儀離子源參數(shù)
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Source/Gas
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Collision
Gas(CAD)
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6
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Curtain
Gas(CUR)
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30
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Ion
Source Gas 1(GS 1)
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50
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Ion
Source Gas 2(GS 2)
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50
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Ion
Spray Voltage(IS)
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-4500
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Temperature(TEM)
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550
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Interface
Heater(ihe)
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On
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表2 氯霉素及內(nèi)標(biāo)的母離子和子離子參數(shù)表
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保留時(shí)間
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保留時(shí)間（min）
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檢測(cè)離子對(duì)
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DP
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EP
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CE
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CXP
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氯霉素
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4.90
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320.9/151.9
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-60
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-10
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-25
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-12
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320.9/256.9
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-60
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-10
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-25
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-12
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氯霉素-D5
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4.90
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326.1/157.0
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-60
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-10
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-25
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-12
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七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
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1、2μg/kg豬肉基質(zhì)氯霉素添加回收結(jié)果
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表3 2μg/kg豬肉基質(zhì)氯霉素添加回收結(jié)果
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名稱(chēng)
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回收率（%）
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平均回收率（%）
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RSD（%）
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1
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2
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3
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氯霉素
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98.31
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96.28
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90.61
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95.07
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4.20
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2、添加水平為2μg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素檢測(cè)色譜圖
圖1 氯霉素及內(nèi)標(biāo)氯霉素-D5總離子流圖 圖2 氯霉素(CAP )(320.9/151.9)質(zhì)譜圖
圖3氯霉素-D5(CAP-D5)(326.1/157.0)質(zhì)譜圖
