葡聚糖凝膠色譜柱的原理

凝膠層析又稱分子排阻層析或凝膠過(guò)濾，是以被分離物質(zhì)的分子量差異為基礎(chǔ)的一種層析分離技術(shù)，這一技術(shù)為純化蛋白質(zhì)等生物大分子提供了一種非常溫和的分離方法。層析的固定相載體是凝膠顆粒，目前應(yīng)用較廣的是：具有各種孔徑范圍的葡聚糖凝膠（Sephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）。

葡聚糖凝膠是由直鏈的葡聚糖分子和交聯(lián)劑3—氯1，2—環(huán)氧丙烷交聯(lián)而成的具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。凝膠顆粒中網(wǎng)孔的大小可通過(guò)調(diào)節(jié)葡聚糖和交聯(lián)劑的比例來(lái)控制，交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)越緊密；交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越疏松，網(wǎng)孔的大小決定了被分離物質(zhì)能夠自由出入凝膠內(nèi)部的分子量范圍。這就使得能進(jìn)入凝膠內(nèi)部與不能進(jìn)入凝膠內(nèi)部的分子，如同按照分子大小過(guò)篩一樣，所以稱為分子篩。可分離的分子量范圍從幾百到幾十萬(wàn)不等。

葡聚糖凝膠柱色譜的分離順序：操作時(shí)首先將凝膠在適宜的溶劑中浸泡，使其充分膨脹，然后再鋪成薄層，加入樣品后，再以同一溶劑洗脫，則樣品中大分子化合物不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只在凝膠顆粒間移動(dòng)，因此阻力小，行動(dòng)快，走在前面;而小分子化合物能自由擴(kuò)散進(jìn)入到凝膠內(nèi)部，因此在色譜時(shí)受到的阻力較大，行動(dòng)慢，走在后面。如此經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的洗脫，混合物中各組分就會(huì)按照分子的大小而獲得分離。

基于葡聚糖凝膠色譜柱的原理，葡聚糖凝膠色譜柱Simpsil Sephadex G-10對(duì)阿莫西林等頭孢類抗生素的分析效果很好。

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